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實時熒光PCR試劑盒的測量原理包括以下幾個方面

瀏覽次數:98發布日期:2024-01-09
  實時熒光PCR試劑盒是用于實時定量PCR(Polymerase Chain Reaction)反應的試劑盒。實時PCR是一種通過檢測靶基因熒光信號的強度來實時監測PCR反應進程的技術。測量原理主要包括以下幾個方面:
 
  1.DNA擴增:實時PCR試劑盒中包含了DNA聚合酶,其能夠與反應體系中的模板DNA結合,并在適當的溫度下進行DNA鏈的合成和擴增。
 
  2.靶基因檢測:加入了與目標基因序列相對應的引物(primer)和探針(probe)。引物是一種短的DNA片段,能夠與目標基因的特定序列互補結合,從而在PCR反應中起到引導DNA合成的作用。探針是一種含有熒光染料和熒光信號猝滅物(quencher)的DNA序列,其與目標基因的特定序列互補結合后,熒光信號被猝滅,從而實現對PCR產物的檢測。
 
  3.熒光信號檢測:在實時PCR過程中,擴增產物數量隨著反應的進行逐漸增加,同時探針與擴增產物結合,使熒光信號減弱。通過實時熒光PCR儀器可以在每個PCR循環后測量熒光信號的強度,根據熒光信號的變化可以確定擴增產物的數量。實時PCR儀器一般會設置閾值來判斷是否存在目標基因,當熒光信號強度超過閾值時,表示PCR反應中存在目標基因。
 
  4.定量測量:通過測量PCR循環次數(CycleThreshold,CT值)來實現基因定量。CT值是從熒光曲線中判斷的某一點,即在此點上熒光信號超過閾值。CT值越小,說明目標基因的起始模板數量越多,反之則起始模板數量較少。通過與已知濃度的標準曲線進行比較,可以計算出樣本中目標基因的初始數量。
 
  實時熒光PCR試劑盒的應用非常廣泛,包括:
 
  1.基因表達分析:可以檢測和定量分析特定基因在不同組織、細胞或時間點中的表達水平。
 
  2.突變檢測:可以用于檢測和鑒定DNA序列中的突變或基因突變體。
 
  3.微生物檢測:可以用于檢測和鑒定病原微生物、細菌或病毒的存在和數量。
 
  4.基因拷貝數定量:可以用于檢測和定量分析基因的拷貝數變化,如染色體異常等。
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